特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱：細(xì)胞色素b5含量測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
檢測(cè)方法：可見(jiàn)分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào)：BK-01S6792
產(chǎn)品分類：P460系列
商品介紹：
測(cè)定意義: 細(xì)胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶，在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用，尤其是藥物和毒物的代謝。細(xì)胞色素P450和細(xì)胞色素b5是P450酶系的兩個(gè)血紅素蛋白，其比值的變化與P450代謝活性密切相關(guān)。 測(cè)定原理： 氧化型細(xì)胞色素b5經(jīng)連二亞硫酸鈉還原后，在424nm處有最大吸收峰，通過(guò)測(cè)定424nm和490nm處吸光值的差異，即可計(jì)算出細(xì)胞色素b5的含量。 自備儀器和用品： 普通離心機(jī)，超速離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測(cè)液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測(cè)；若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
1瓶 LLC-MK2細(xì)胞株 LLC-MK2 低溫運(yùn)輸和保存
平板計(jì)數(shù)瓊脂（PCA） Plate Count Agar 250g
80KU DNA ，Ⅱ型 Deoxyribonuclease Ⅱ(Porcine Spleen) -20℃保存
250mL Succinate Buffer（琥珀酸緩沖液）,0.2M,pH5.5 Succinate Buffer,0.2M,pH5.5 常溫保存
50次 昆蟲細(xì)胞裂解液
5mL Proteinase K Solution（蛋白K溶液）,10mg/mL Proteinase K Solution（,10mg/mL 常溫保存
100g RNSarkosyl (月桂酰-N-甲基氨基乙酸鈉) 常溫
2 ug pCMV-SPORT6 KIAA0372 pCMV-SPORT6 KIAA0372 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
改良Skirrow瓊脂添加劑 Modified Skirrow Agar Additives 1ml*5支
100mL 聚乙烯亞胺 Poly(Ethyleneimine) Solution 室溫保存
50T 人血管生長(zhǎng)因子VEGF-cPCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
細(xì)胞色素b5含量測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法DHFRL1 二還原樣1抗體 規(guī)格: 0.2ml
TGF Beta 1 轉(zhuǎn)化生因子β1抗體 規(guī)格: 0.1ml
NSDHL 類固醇脫樣蛋白NSDHL抗體 規(guī)格: 0.2ml
GPR30 G蛋白偶聯(lián)受體30抗體 規(guī)格: 0.1ml
PIGR 多聚免疫球蛋白受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Goat Anti-rat IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
PCDHGA7 原鈣粘蛋白γA7抗體 規(guī)格: 0.2ml
ZNF354C 鋅指蛋白354C抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-RAD51(Tyr315) 磷酸化Rad51抗體 規(guī)格: 0.1ml
TIF1 gamma/Trim33 轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1γ抗體 規(guī)格: 0.2ml
CKLFH1/CMTM1 趨化素樣因子超家族成員1抗體 規(guī)格: 0.2ml
GSTCD 硫轉(zhuǎn)移C段結(jié)構(gòu)域抗體 規(guī)格: 0.2ml
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是（1）試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒(méi)有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min）。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通?？梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
