特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱：土壤脫氫酶(SDHA)測試盒可見分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
檢測方法：可見分光光度法
產(chǎn)品貨號：BK-01S6844
產(chǎn)品分類：土壤系列
商品介紹：
測定意義: 土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內(nèi)活性微生物量以及其對有機(jī)物的降解活性，可以作為土壤微生物的降解性能指標(biāo)。 測定原理： 氫受體2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC）在細(xì)胞呼吸過程中接受氫以后，被還原為三苯基甲鐟（Triphenyl Formazone, TF），TF呈現(xiàn)紅色，在波長485nm處有最大吸收峰，采用分光光度法于485nm測定其吸光值，即得土壤脫氫酶活性。 自備實(shí)驗(yàn)儀器及用品： 篩子、天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機(jī)、漏斗，濾紙、可見分光光度計(jì)、玻璃比色可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、1 mL玻璃比色皿/96孔板、冰、蒸餾水、丙酮（不允許快遞，請用戶自備）。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
抗生素5號 Antibiotic NO.5 250g
1瓶 D341 Med細(xì)胞株 D341 Med 低溫運(yùn)輸和保存
含TSA平板（7cm） Tryptose Soya Agar 10個/包
10U ATP硫酸化 ATP Sulfurylase -20℃保存
500mL PIPES Buffered Saline，5X,pH7.0 PIPES Buffered Saline，5X,pH7.0 常溫保存
1g 氨芐干粉 Ampicillin Powder 4℃保存
2 ug pPink LC pPink LC 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
葡萄糖發(fā)酵管 20支
2 ug pMSCV-puro pMSCV-puro 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
mCPC mCPC Medium 250g
25g L- 鹽酸鹽 L-Histidine HCl 室溫干燥保存
土壤脫氫酶(SDHA)測試盒可見分光光度法EMP3 上皮細(xì)胞膜蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2mlELL2 聚合延伸因子2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Donkey Anti-Guinea pig IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Bad(Ser118) 磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-c-Jun(Tyr170) 磷酸化原基因c-Jun抗體 規(guī)格: 0.1mlbeta 2 Microglobulin β2微球蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG(3D3)/Cy3 Cy3標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-HER4 (Tyr1162) 磷酸化HER4抗體 規(guī)格: 0.1ml
CK15 細(xì)胞角蛋白15抗體 規(guī)格: 0.1mlCYP24A1 細(xì)胞色素P450 24A1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Mast Cell Tryptase 肥大細(xì)胞蛋白7抗體 規(guī)格: 0.1mlFactor VII light chain 凝因子VII 規(guī)格: 0.2ml
RABGAP1 Rab蛋白GTP激活蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlCOX7A2 氧化VIIA亞型2抗體 0.1ml
Phospho-Insulin Receptor Beta(Tyr1185) 磷酸化胰島素受體β抗體 規(guī)格: 0.1mlCollagen VII 7型膠原抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-EPH A3+A4+A5 ( Tyr779) 磷酸化內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪激A3+A4+A5抗體 規(guī)格: 0.1ml
SPARCL1/Ecm2 細(xì)胞外基質(zhì)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-NMDAR1(Ser897) 磷酸化谷受體1抗體 規(guī)格: 0.1ml
FDC-SP/ADC 濾泡樹突細(xì)胞分泌蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時間不夠，可以延長反應(yīng)時間（反應(yīng)時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通常可以使測定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
