特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱：糖原合成酶（GCS）測試盒微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
檢測方法：微量法
產(chǎn)品貨號：BK-01S6980
產(chǎn)品分類：糖原系列
商品介紹：
測定意義: GCS（EC 2.4.1.11）催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP，以α-1，4-糖苷鍵相連延長糖鏈，是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶，是胰島素作用的主要靶酶，對糖代謝的調(diào)節(jié)和血糖穩(wěn)態(tài)的維持具有重要作用。 測定原理： GCS催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下測定NADH下降速率，即可反映GCS活性。 需自備的儀器和用品： 分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗
樣本和試劑浪費！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 |
實驗方法學：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
1瓶 Daoy細胞株 Daoy 低溫運輸和保存
TSA平板（9cm） TSA 10個/包
200U T4 DNA連接（T4 DNA Ligase) T4 DNA Ligase -20℃保存
125mL PIPES Lysis Buffer with NP-40，2X PIPES Lysis Buffer with NP-40，2X 常溫保存
1mL 博萊溶液,10mg/mL Bleomycin Solution -20℃避光保存
2 ug pPICZα B pPICZα B 低溫運輸，-20℃保存
0.4mg無菌水溶液 0.4mg/支*20
2 ug pCAGGS pCAGGS 低溫運輸，-20℃保存
副溶血性弧菌瓊脂 Vibrio parahaemolyticus agar 250g
100mg 透明質(zhì)酸 Hyaluronidase -20℃保存
50T 口蹄疫病毒A亞型PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
糖原合成酶（GCS）測試盒微量法Rabbit Anti-dog IgG/Cy5 Cy5標記的兔抗狗IgG 規(guī)格: 0.1mlNSMase2 中性鞘磷脂2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Calponin 1/COLP 鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體 規(guī)格: 0.1mlMEI-1 減數(shù)分裂缺陷蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
C16orf7/ATP-BL 16號染色體開放閱讀框7抗體 規(guī)格: 0.2ml
Shrimp tropomyosin 南美白對蝦過敏原蛋白（蝦原肌球蛋白）抗體 規(guī)格: 0.1ml
GHDC GHDC蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-Met (Tyr1003) 磷酸化肝細胞生因子受體(原基因)抗體 規(guī)格: 0.1ml
EIF5 真核翻譯起始因子5抗體 0.2ml
Goat Anti-Bovine IgG/Cy3 Cy3標記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml
LRFN3/SALM4 神經(jīng)突觸粘附樣分子4抗體 規(guī)格: 0.2ml
LRP12 脂蛋白受體相關(guān)蛋白12抗體（抑制瘤蛋白7） 規(guī)格: 0.2ml
phospho-MARK2(Thr595) 磷酸化絲/蘇蛋白激MARK2抗體 規(guī)格: 0.1ml
ERα/ESR1 雌激素受體α抗體 規(guī)格: 0.1ml
注意事項：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應時間不夠，可以延長反應時間（反應時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。
