STORM(Stochastic Optical Reconstruction Microscopy)隨機光學(xué)重構(gòu)顯微鏡是單熒光分子照相技術(shù)的延伸成果。受光的衍射局限,非常鄰近的熒光分子的發(fā)光通過物鏡后,焦平面上的光點是大部分重疊的,如果我們可以使這樣的分子不同時發(fā)光,并且先后拍攝它們的獨立發(fā)光圖像,我們就可以將這些發(fā)光點的中心點逐一描繪出來,重構(gòu)出一幅完整的、高分辨率的圖像。
Ø STORM超高分辨率顯微鏡是美國哈佛大學(xué)華人科學(xué)家莊曉威發(fā)明的超高分辨率顯微成像技術(shù),尼康公司獨立引進這一技術(shù),在市場上正式推廣“N-STORM”。
Ø N-STORM的核心優(yōu)勢在于“Alexa647”這種高量子產(chǎn)率的染料分子的應(yīng)用:N-STORM可以用Alexa405-Alexa647、Cy2-Alexa647、Cy3-Alexa647三種配對染料標(biāo)記靶分子,通過配對的激光交替照射,Alexa647熒光分子可以在暗態(tài)與亮態(tài)之間反復(fù)切換,從而取得單分子照相的條件。N-STORM對1000幀以上的單分圖像進行重構(gòu),獲得超高分辨率熒光圖像。
超高分辨率顯微鏡
Ø 此外,N-STORM通過在光路中引入圓柱鏡片,實現(xiàn)了Z軸上的超高分辨率的成像。
Ø N-STORM橫向分辨率20nm,縱向分辨率50nm。