雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊 |
雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒 | 100次 | 詢價(jià) |
|
由于檢測光量子的方法非常敏感,采用生物發(fā)光(bioluminescent)法 ,是報(bào)告基因檢測常用的有效手段。熒光素酶(luciferase)催化底物熒光素(luciferin)的轉(zhuǎn)化,發(fā)射出光子。螢火蟲熒光素酶(Firefly luciferase)和海腎熒光素酶(Ranilla luciferase)催化的發(fā)光反應(yīng),具有相似的光學(xué)特征和很好的濃度線性范圍(7~8個(gè)數(shù)量級的線性范圍),酶的檢測靈敏度達(dá)10-18~10-20 mol,但兩者催化的化學(xué)反應(yīng)底物和適反應(yīng)條件*不同。利用這一特性,將這兩種熒光素酶配合,即可形成十分有效的雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng),其中Ranilla luciferase通常作為內(nèi)參照。本試劑盒提供了一體化形式的雙熒光素酶檢測系統(tǒng)。采用通用裂解緩沖液,適合于兩種熒光素酶活性的保持,且與其他類型的報(bào)告基因檢測和蛋白含量檢測兼容。優(yōu)化的兩種酶反應(yīng)體系,使每種發(fā)光反應(yīng)持續(xù)數(shù)十分鐘,以便于手工操作多個(gè)樣品,并保證Firefly luciferase發(fā)光及時(shí)淬滅,不影響后續(xù)Ranilla luciferase的測定。優(yōu)化的反應(yīng)體系還使兩種熒光素酶活性比值趨于合理的敏感范圍,更有利于后續(xù)數(shù)據(jù)的比較。該產(chǎn)品特點(diǎn)如下:
1. 準(zhǔn)確性高:使用海腎熒光素酶作為內(nèi)參照,減少了細(xì)胞數(shù)目、細(xì)胞健康狀態(tài)、轉(zhuǎn)染效率和非特異性細(xì)胞反應(yīng)等因素的影響,使主報(bào)告基因的結(jié)果歸一化
2. 高度靈敏:對兩種熒光素酶的檢測靈敏度達(dá)10-18~10-20 mol
3. 線性范圍寬:線性范圍達(dá)到7~8個(gè)數(shù)量級
4. 快速簡便:一體化兩步法檢測,特別適合于高通量篩選
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
相關(guān)產(chǎn)品列表:
小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA Kit
小鼠抵抗素(Resistin)ELISA Kit
小鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA Kit
小鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA Kit
小鼠凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)ELISA Kit
小鼠疊氮胸苷(AZT)ELISA Kit
小鼠毒性休克綜合征毒素1(TSST-1)ELISA Kit
小鼠對氨基苯甲酸(PABA)ELISA Kit
小鼠多巴胺(DA)ELISA Kit
小鼠多巴胺D1受體(D1R)ELISA Kit
小鼠兒茶酚胺(CA)ELISA Kit