淋巴細(xì)胞分離液A型(人)
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊 |
淋巴細(xì)胞分離液A型(人) | 100mL | 詢價(jià) |
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本產(chǎn)品是基于聚蔗糖(Ficoll 400)和泛影葡胺的混合物,專門用于離心法分離人血液單個(gè)核細(xì)胞(包括淋巴細(xì)胞和單核粒細(xì)胞)的標(biāo)準(zhǔn)溶液。它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,非常方便。
2. 具有低粘度、低滲透壓、無毒特點(diǎn)。
3. 使用簡單,將本產(chǎn)品放置在管底層,鋪上抗凝全血后低速離心后即可。吸取血漿層和分離液界面的白膜狀條帶,該層細(xì)胞洗滌去除血小板得到純凈的單個(gè)核細(xì)胞。紅細(xì)胞和多核粒細(xì)胞密度大于分層液而沉積于管底。
4. 純度高,所得單核粒細(xì)胞純度~95%,淋巴細(xì)胞純度90~95%,
5. 回收率約80%以上。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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