Soluble human VCAM-1 ELISA Kit
規(guī)格： 96T
檢測(cè)范圍： 156pg/ml→10,000pg/ml
敏感性： ＜5pg/ml
特異性： 系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無交叉反應(yīng)。
保存： 2-8℃（頻繁使用時(shí)）；-20℃（長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)）。
有效期： 6 個(gè)月(4℃)；12 個(gè)月（-20℃）。
用途： 用于體外定量分析人血清、血漿、細(xì)胞裂解液或細(xì)胞培養(yǎng)上清。
Soluble human VCAM-1 ELISA Kit工作原理
VCAM-1（CD106），免疫球蛋白家族一員，由活化內(nèi)皮細(xì)胞和某些白細(xì)胞（如巨噬細(xì)胞）產(chǎn)生。
IL-1β，IL-4，TNF-α，IFN-γ都可以誘導(dǎo)其表達(dá)。VCAM-1 結(jié)合 inetgrins VLA 和α4β7。炎
癥時(shí)，移動(dòng)的白細(xì)胞通過 inetgrins VLA 和α4β7 偶合 VCAM-1，穩(wěn)定地吸附到血管內(nèi)皮。ELISA
方法可以檢測(cè)出可溶性的 VCAM-1。本試劑盒所用標(biāo)準(zhǔn)品為重組人 VCAM-1，單鏈從
Phe25-Glu698 位氨基酸，分子量約 74KDa。由于糖化結(jié)果，SDS-PAGE 顯示分子量為 90-95KDa。
所提供的人 VCAM-1 ELISA Kit 是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（Enzyme
Linked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA）。預(yù)先包被的抗體和檢測(cè)相抗體為近 100%純度的親和純化多克隆抗體。檢測(cè)相抗體經(jīng)生物素（biotin）標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反
應(yīng)后，PBS 或 TBS 洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過 PBS 或 TBS 的*洗滌
后用底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃
色。顏色的深淺和樣品中的人 VCAM-1 呈正相關(guān)。
內(nèi)容 | 規(guī)格 | 數(shù)量 |
預(yù)包被抗VCAM-1 抗體的 96 孔板 | 96T | 1 |
凍干標(biāo)準(zhǔn)品 | 10ng/管 | 2 |
生物素標(biāo)記 | 130ul | 1 |
親和素-過氧化物酶復(fù)合物 | 130ul | 1 |
樣品稀釋液 | 30ml | 1 |
抗體稀釋液 | 12ml | 1 |
ABC 稀釋液 | 12ml | 1 |
TMB 顯色液 | 10ml | 1 |
TMB 終止液 | 10ml | 1 |
洗滌緩沖液(25X) | 20ml | 1 |
封板膜 |
| 2 |
說明書 |
| 1 |
需要而未提供的試劑和器材
1. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
2. 自動(dòng)洗板機(jī)。
3. 恒溫箱
4. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，用多通道移液器。
5. 干凈的試管和 Eppendof 管。
6. 用去離子水將 25X 洗滌緩沖液稀釋 25 倍，成 1X 洗滌緩沖液。
注意事項(xiàng)
1． 使用前 TMB 顯色液應(yīng)為無色透明溶液，若發(fā)現(xiàn)顏色異常，請(qǐng)及時(shí)與廠家。
2． 用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
3 要嚴(yán)格避免操作過程中酶標(biāo)板干燥。干燥會(huì)使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活。
4． 為免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。
5． 禁止混用不同批次試劑盒內(nèi)的試劑。
6. 本公司提供的 96 孔酶標(biāo)板是單條可拆型酶標(biāo)板，用戶可按需求使用；剩余的酶標(biāo)板請(qǐng)
按保存條件貯存。
7. 揭封板膜和覆蓋封板膜時(shí)應(yīng)避免用力過大導(dǎo)致液體濺出。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將 1X 洗滌緩沖液至少 300ul 注入孔內(nèi)，浸泡 1-2 分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。
樣品的準(zhǔn)備和保存
樣品如果不立即分析，應(yīng)分裝后冷凍保存，且避免反復(fù)凍融。
細(xì)胞培養(yǎng)上清——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
血清——用干凈試管收集血液，室溫凝固 30 分鐘，離心 1500×g 15 分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
血漿—在冰塊上收集肝素或 EDTA 抗凝血，抽血后 30 分鐘內(nèi)離心 1500×g 15 分鐘。血漿在 2-8℃進(jìn)一步離心 10000×g 10 分鐘，以*清除血小板。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
細(xì)胞裂解液——對(duì)于貼壁細(xì)胞，去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液，用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常 10 秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。對(duì)于懸浮細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液，用槍吹打把細(xì)胞吹散，用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后，10000—14000g 離心 3-5 分鐘，取上清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
樣品稀釋的一般原則
用戶須估計(jì)樣品待測(cè)因子的含量，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測(cè)因子的濃度處于ELISA 試劑盒的*檢測(cè)范圍。根據(jù)待測(cè)因子含量高、中、低的不同，分別采取不同的
稀釋方案：
高——指待測(cè)因子在 20-200ng/ml。一般按 1：100 稀釋。297ul 樣品稀釋液加 3ul 樣品。
中——指待測(cè)因子在 2-20ng/ml。一般按 1：10 稀釋。225ul 樣品稀釋液加 25ul 樣品。
低——指待測(cè)因子在 31.2-2000pg/ml。按 1：2 稀釋。100ul 樣品稀釋液加 100ul 樣品。
特低——指待測(cè)因子≤31.2pg/ml。樣品一般不做稀釋，或按 1：2 稀釋。
操作程序總結(jié)：
1． 加樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng) 90 分鐘。不洗。
2． 加生物素標(biāo)記抗體，37℃反應(yīng) 60 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 3 次。
3． 加 ABC，37℃反應(yīng) 30 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 5 次。
4． TMB37℃反應(yīng) 15-20 分鐘。
5． 加入 TMB 終止液，讀數(shù)。
大鼠 補(bǔ)體片斷3a C3a Complement fragment 3a
大鼠 補(bǔ)體片斷5a C5a Complement fragment 5a
大鼠 不對(duì)稱二甲基精氨酸 ADMA asymmetrical dimethylarginine
大鼠 草酸 OA oxalic acid
大鼠 層粘連蛋白 LN Laminin
大鼠 叉頭型基因P3 FOXP3 forkhead box P3
大鼠 腸三葉因子 ITF Intestinal trefoil factor
大鼠 腸脂肪酸結(jié)合蛋白 iFABP intestinal fatty acid binding protein
大鼠 超敏C反應(yīng)蛋白 hs-CRP high sensitivity C-Reactive Protein
