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產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 保存 | 價(jià)格(元) |
一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng)) | C4056L1060 | 48 T | -20℃ | 1050 |
產(chǎn)品描述
《一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒》主要用于檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清或別的液體樣品（如血清）中是否含有支原體污染，該試劑盒僅用于基礎(chǔ)科研。
哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)，支原體（Mycoplasma）污染是個(gè)世界性的問(wèn)題。支原體污染幾乎可以改變細(xì)胞的所有參數(shù)，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確、甚至*錯(cuò)誤。從2013年開(kāi)始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細(xì)胞培養(yǎng)都要進(jìn)行支原體檢測(cè)。
本試劑盒可以檢測(cè)：（1）M.Hyorhinis、（2）M.Fermentans、（3）M.Arginini、（4）M. hominis、（5）M. orale、（6）M. salivarium、（7）M.pirum、（8）Acholeplasma Laidlawii、（9）M. agalactiae、（10）M.bovis、（11）M. buccale、（12）M. arthritidis、（13）M. pulmonis等幾乎所有常見(jiàn)的污染細(xì)胞的支原體（注：M.為Mycoplasma的縮寫(xiě)）。以上13種支原體約占細(xì)胞支原體污染的99%以上，本試劑盒產(chǎn)品全部可以檢測(cè)。絕大多數(shù)支原體污染集中于前8種。注意：本試劑盒無(wú)法檢測(cè)Ureaplasma Urealyticum支原體！Ureaplasma Urealyticum在支原體污染種極其罕見(jiàn)。
與PCR法檢測(cè)支原體比較，本試劑盒產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)優(yōu)勢(shì)顯著：
比較內(nèi)容 | 支原體檢測(cè)PCR法 | 一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒 |
操作時(shí)間 | 3小時(shí) | 1小時(shí) |
是否需要樣品處理 | 樣品處理，DNA提取 | 無(wú)需樣品處理，直接使用上清 |
靈敏度 | 靈敏度低 | 較PCR法提高1000倍 |
是否需要電泳 | 需要電泳及染色 | 不需電泳，結(jié)果目測(cè) |
使用方法
1. 反應(yīng)
（1）取三個(gè)反應(yīng)管，分別標(biāo)記為陽(yáng)性對(duì)照管（Positive）、測(cè)試管（Test）和陰性對(duì)照管（Negative），各加入25 μL的水化溶液（-20℃保存的水化液可以放37℃水浴融化），吹吸數(shù)次直到所有凍干粉劑*溶解（凍干品較難溶解，需要緩慢吹吸約20-50下。此過(guò)程，如有大氣泡產(chǎn)生或者小氣泡過(guò)多，必須去除，否則嚴(yán)重影響反應(yīng)結(jié)果！氣泡可以用套管離心的方法去除）。盡量在沒(méi)有操作過(guò)支原體的房間進(jìn)行上述步驟。將所有反應(yīng)管蓋子蓋上，在另外一個(gè)房間內(nèi)進(jìn)行下一步的操作。
（2）往陽(yáng)性對(duì)照管中加入1 μL陽(yáng)性支原體DNA，測(cè)試管中加入1 μL待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液，陰性對(duì)照管不加。
（3）選擇以下方式之一進(jìn)行反應(yīng)：
① 水浴內(nèi)反應(yīng)：往每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)加入25 μL礦物油，以防止水份揮發(fā)，蓋上蓋子，將反應(yīng)管插入帶孔的漂板內(nèi)，放入已經(jīng)升溫到61℃的水浴內(nèi)，準(zhǔn)確反應(yīng)60分鐘。
l 注：試劑盒所用的酶對(duì)溫度敏感，器顯示溫度與實(shí)際溫度的溫差盡量不超過(guò)0.5℃。如果溫差超過(guò)2℃，將導(dǎo)致酶活性降低，擴(kuò)增速度也降低，在規(guī)定的反應(yīng)時(shí)內(nèi)，陽(yáng)性對(duì)照可能無(wú)法呈現(xiàn)典型的藍(lán)綠色。此時(shí)需用水銀溫度計(jì)校準(zhǔn)水浴的溫度。
② PCR儀上反應(yīng)：有PCR儀的實(shí)驗(yàn)室，強(qiáng)烈建議在PCR儀上進(jìn)行反應(yīng)，這樣可以準(zhǔn)確控制反應(yīng)的時(shí)間和溫度。PCR儀參數(shù)如下：61℃，60 min；20℃, ∞；熱蓋溫度，100 ℃。
l 注：在帶熱蓋的PCR儀上進(jìn)行反應(yīng)，無(wú)需在反應(yīng)管內(nèi)加入礦物油。
2. 結(jié)果判斷：61℃反應(yīng)60分鐘后，立刻取出反應(yīng)管，放于室溫。以一張白紙或白色泡沫盒（優(yōu)選白色泡沫）為背景，通過(guò)反應(yīng)管溶液顏色的變化，即可判斷檢測(cè)結(jié)果。如果溶液為藍(lán)綠色，則說(shuō)明有支原體污染；如果為粉紅色或紫紅色，則說(shuō)明沒(méi)有支原體污染（如圖1）。
l 注1：有時(shí)，同一批次陰性反應(yīng)之間的顏色也可能會(huì)略有差異屬于正常現(xiàn)象，比如有些呈粉紅色，有些呈紫紅色。只在待測(cè)樣品與陽(yáng)性對(duì)照一樣呈典型的藍(lán)綠色時(shí)，可判定為陽(yáng)性，有支原體污染。
l 注2：反應(yīng)結(jié)果的判斷，必須在反應(yīng)后2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行判斷，因?yàn)榧词乖谑覝?，擴(kuò)增反應(yīng)也會(huì)緩慢進(jìn)行，反應(yīng)管顏色也會(huì)逐漸變化，反應(yīng)后長(zhǎng)時(shí)間放置，可能出現(xiàn)錯(cuò)判。
