產(chǎn)品名稱：人*結(jié)合蛋白(RBP)ELISA 試劑盒
：135 64515386
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
ELISA試劑盒說明書
Elisa試驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)室中比較常見，那么elisa實(shí)驗(yàn)具體步驟怎么做，有沒有比較詳細(xì)的elisa試劑盒說明書呢？
Elisa試劑盒說明書如下：
ELISA試劑盒說明書1:用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10靏／ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。
2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3.加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。
4.加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。 5.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。 ELISA試劑盒說明書二：用于檢測未知抗體的間接法：
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10靏／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。 2.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照）
3.于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
4.于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘 5.于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6.可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
ELISA 是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法，由于其試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡便、結(jié)果判斷較客觀等因素，以及既適宜于大規(guī)模篩查試驗(yàn)又可以用于少量標(biāo)本的檢測，既可以做定性試驗(yàn)也可以做定量分析等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子等領(lǐng)域
人*結(jié)合蛋白(RBP)ELISA 試劑盒間接法簡單操作步驟：
?。?/span>1）、將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗原；
（2）、加稀釋的受檢血清，保溫反應(yīng)。血清中的特異抗體與固相抗原結(jié)合，形成固相抗原抗-體復(fù)合物；
（3）、加酶標(biāo)抗抗體；
?。?/span>4）、加入酶促反應(yīng)底物，發(fā)生顯色反應(yīng)，顯色的深淺與待測抗體的量成正比。
ELISA試劑盒操作技術(shù)相關(guān)的注意事項(xiàng)：
- (FAS/CD95)ELISA試劑盒說明書進(jìn)行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30～60min。
⑵ 加樣后及時放人孵箱。標(biāo)本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。
(3)封板溫育時，各孔一定要封嚴(yán)，防止陽性標(biāo)本的液體蒸發(fā)，產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
(4)用洗板機(jī)洗板時，保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干：還要防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
(5)合理安排檢測量，以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
(6)加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
(7)顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用。
(8)加樣時保持顯色劑不外流;A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
(9)應(yīng)保證C清潔，整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至限度。從而提高檢測的特異性。并得到更準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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